【摘要】　目的　研究2 例Ph 染色体阳性慢性粒细胞白血病慢性期(CML2CP) 患者异常的bcr/ abl融合基因结构。方法　分别采用常规的M2及μ2型bcr/ abl 融合转录子特异性引物进行逆转录2聚合酶链反应(RT2PCR) ,对RT2PCR 扩增产物测序进行序列同源性分析,以确定扩增产物的成分及bcr/ abl融合转录子类型,其中1 例根据测序结果设计引物并通过PCR 研究其DNA 水平bcr 与abl 基因融合方式。结果　2 例患者临床表现均符合典型CML2CP 特征,RT2PCR 扩增后均未见典型的M2及μ2型扩增带,而分别出现一条异常的条带,产物大小分别介于M2及μ2bcr/ abl 之间及小于M2bcr/ abl。经序列分析证明RT2PCR 产物均含有bcr 及abl 基因序列,例1 的bcr 基因断裂发生在第18 外显子(e18) 内部,abl 基因融合位点为常见的外显子2 (a2) 处,它们之间插入了40 bp 的部分abl 基因内含子1b 序列,为一种新型的符合阅读框架结构的bcr/ abl 融合转录子e182int2a2 。经PCR 证明该融合发生在DNA 水平。例2 的融合转录子中缺失典型M2bcr/ abl (b2a2) 融合基因中abl 基因外显子2 (a2) ,为e13a3 (b2a3)型。结论　少见型bcr/ abl 融合基因可见于典型Ph 染色体阳性CML 患者并产生异常的RT2PCR 扩增
带

讨论
　　绝大部分CML 为M2bcr/ abl 型,个别为μ2或m2型。目前国际上已经报道了十余种少见的bcr/abl 融合基因类型,个别病例bcr 基因断裂发生于外显子内部或有内含子序列的插入,还未见bcr 基因断裂于e18 内部的报道,我们发现e182int2a2 型融合基因未见报道。由于m2型bcr/ abl 融合基因主要见于ALL ,而bcr/ abl 融合基因中bcr 基因序列只包含bcr e1 ,因此bcr 基因片段很短。M2型bcr/ abl 融
合基因主要见于CML , bcr 的成分含有13 或14 个外显子(分别为b2a2 或b3a2) ,bcr 基因片段较长。
μ2型bcr/ abl 融合基因的CML 患者一般临床表现较缓和,部分患者以成熟中性粒细胞明显增多为主,而bcr/ abl 融合基因中bcr 的成分含有19 个外显子,bcr 基因片段最长。因此一般认为含有bcr 基因片段越长,临床表现越缓和[4 ] 。不过仍有少部分具有μ2型bcr/ abl 融合基因患者呈典型CML 表现的病例报道[2 ] 。我们已发现3 例患者具有μ2型bcr/ abl 融合基因,均呈现典型的CML 特征,其中1 例已经急变[5 ] 。e182int2a2 型患者bcr 基因断裂点介于M2型与μ2型之间,相应的BCR/ ABL 蛋白相对分子质量也介于P210BCR/ ABL 及P230BCR/ ABL 之间, 推测约为
223 ×103 。患者的临床表现及细胞形态学和免疫分
型的结果均符合典型CML2CP。abl 基因外显子2 (a2) 共编码58 个氨基酸,其中
17 个氨基酸为ABL 蛋白SH3 区(Src 同源区3) 的部分序列,目前认为SH3 的主要作用为下调SH1 区酪氨酸激酶活性,理论上a2 缺失会引起ABL 蛋白
酪氨酸激酶活性增高,转化能力增强。不过到目前为止国际上报道的abl 基因融合位点为a3 的bcr/abl 融合基因病例共9 例[6 ,7 ] ,b2a3 型4 例,b3a3 型2 例,e1a3 型2 例,1 例同时具有e1a3 及b2a3 ,其中4 例为ALL ,4 例为CML ,1 例未知。所以a2 缺失的bcr/ abl 融合基因既可以引起ALL ,也可以引起临床表现相对缓和的CML 。我们报道的这例b2a3患者以典型的CML2CP 表现发病。
各种少见型bcr/ abl 融合基因的存在证明bcr/abl 融合基因的形成可以发生于外显子内部,也可以有内含子的插入,形成的mRNA 只要符合阅读框架(in2f rame) ,能翻译出完整的BCR/ ABL 蛋白,尤其是保留了绝大部分ABL 蛋白(SH1 酪氨酸激酶区) ,就有可能引发CML 。90 %～95 %CML 患者具有Ph 染色体,5 %具有变异型Ph 染色体,大部分Ph 染色体阴性CML 患者可以检测到bcr/ abl 融合基因,理论上所有核型分析可见Ph 染色体的标本都可以检测到bcr/ abl 融合基因,少见型bcr/ abl 融合转录子的存在可能是造成Ph 染色体阳性而RT2PCR 阴性的主要原因。尽管不寻常型bcr/ abl 融合基因很少,但是利用RT2PCR 技术检测其存在,无论对于临床诊断还是作为一项治疗监测指标都非常重要。因此在利用RT2PCR 技术检测bcr/ abl 融合转录子时若扩增出非典型条带,应结合临床仔细分析,如果
该扩增条带较明显,不似非特异扩增产物,不要简单认定为bcr/ abl 融合基因阴性,应进一步进行基因测序分析,以确定是否存在特殊类型的融合基因。
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(收稿日期:2003209218)
·412 · 中华血液学杂志2004 年7 月第25 卷第7 期　Chin J Hematol ,J uly 2004 ,Vol 25 ,No. 7
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